这个世界上总是有两种势力，一方是邪恶的黑暗势力，而另一方则是永远和黑暗势力相抗争的正义的力量。黑暗势力似乎一刻都不会安宁，他们总是不甘心一直“黑暗”下去。在遥远的沙漠深处，吸血鬼的首领唤醒了沉睡七千年的吸血鬼德雷克(多米尼克·珀塞尔饰)，这位古老的吸血鬼家族的祖先因为纯正的血统而拥有吸血鬼后辈永远无法企及的超强法力，那就是阳光无法阻挡他的黑暗力量，对于其他吸血鬼来说是致命的阳光对他却没有任何的影响，他在白天还能自由行动。吸血鬼们将他唤醒的目的是希望通过对他基因的研究，找出吸
血鬼对抗日光的秘密。
而每当黑暗势力蠢蠢欲动之时，正义的一方总是会有人挺身而出，与黑暗势力进行殊死的斗争。这次与吸血鬼们周旋的依然是他们的老对手，吸血鬼猎手刀锋战士布雷德(韦斯利·斯奈普斯饰)。这次，为了能让布雷德不影响他们的计划，吸血鬼的领袖对刀锋战士实施了一项恶毒的诽谤计划，他们把刀锋战士定义为了一个杀人怪物，让人类误以为他是杀人的怪物，吸血鬼们制作了种种伪证并将它们送给了FBI，以卡伯兰德 (詹姆士·莱默饰)为首的FBI开始了对他的追捕，刀锋战士陷于两个势力的围捕之中，急需别人的帮助。
于是，刀锋战士找到了他的导师惠斯勒(克里斯·克里斯多佛森饰)，布雷德在惠斯勒的帮助下与FBI消除了误会。同时，为了阻止吸血鬼们阴谋，刀锋战士极不情愿地与一群由人类组成的猎捕吸血鬼的小队结成了同盟。与刀锋战士合作的是两名夜行者(Nightstalkers)，他们就是刀锋战士的导师惠斯勒的漂亮女儿阿比盖尔(杰西卡·贝尔饰)和她总是喜欢说风凉话的哥哥汉尼拔·金(瑞安·雷诺兹饰)。夜行者是一个专门对付吸血鬼的古老人类家族，他们曾发动过一系列无情的战争来对付德古拉伯爵未死的子孙，并期待着最后胜利的那一天。这次，刀锋战士布雷德与阿比盖尔和汉尼拔·金三人一起，再次踏上了拯救人类的征程。
这部影片是系列影片《刀锋战士》的第三部，也是最后的完结篇。与其他一些著名的正义使者：超人、蝙蝠俠和蜘蛛人一样，《刀锋战士》系列影片的主人公刀锋战士同样是来自畅销的漫画书。在20世纪70年代，刀锋战士这个吸血鬼猎手的原型开始出现在因创作蜘蛛人而闻名的漫画公司Marvel的系列漫画《Tomb of Dracula》之中，但与前面的那些大名鼎鼎的英雄人物不同，刀锋战士在漫画中并不是主要人物，他只不过是一个小配角，但正是这个“半人半僵尸”小配角却创造了令众多主角都自叹不如的票房成绩。1998年，刀锋战士的形象被搬上了银幕，而他的首次亮相就取得了巨大的成功，影片《刀锋战士》在北美创造了7000万美元的票房佳绩，在全球共获得1亿3千万的票房收入。2002年，《刀锋战士》又推出了续集《刀锋战士II》，其票房较第一集更进一步，在北美和全球分别获得了8160万美元和1亿5千万美元的票房收入。本次，新线影业公司携《刀锋战士：三位一体》卷土重来，力求再创佳绩。
