抗日战争时期，山东南部枣庄矿区以刘洪、王强为首的一批煤矿工人和铁路工人，不堪日寇的欺压和蹂躏，在中国共产党的领导下，秘密建立起一支短小精悍的游击队，他们“飞车搞机枪”、“血染洋行”、“智打票车”、“夜袭临城”、“打冈村”、“搞情报”、“夺布车”、“上济南”、“下徐州”……活跃在日军侵华战争的主要铁路命脉——津浦线的山东沿线，鼓舞了铁路沿线人民的抗战士气，有力配合了主力部队的对日作战，老百姓称他们“飞虎队”，他们在八路军中的正式番号是“铁道游击队”……
枣庄和《水浒》中108条好汉聚义的梁山相隔不远，鲁汉、林忠、彭亮、小坡等许多铁道游击队队员，从小受到梁山好汉的影响，性格中既有仗义豪放的英雄气概，也有桀骜不驯的草莽影子，他们开始加入铁道游击队后，不适应严格的组织纪律，和政委李正、队长刘洪之间产生了不同的矛盾，有的最终被开除队伍。在残酷的斗争中，在一次次血的教训面前，经过李正和刘洪耐心的教育和帮助，这些队员逐渐改掉劣习，成长为党的抗日英雄，鲁汉、林忠为民族的解放，献出了自己的生命。
铁路工人芳林是刘洪的好朋友，为了给铁道游击队送情报，死在日寇的枪口下。芳林临终前，把妻子托付给刘洪。在生死的战斗中，刘洪和芳林嫂彼此产生了爱恋之情。刘洪碍于芳林的兄弟之情，把感情深深埋藏在心里……
日本侵略军为了消灭心腹之患的铁道游击队，在铁道线附近采取了残酷的扫酷的扫荡和绞杀，使用了种种阴谋，组织了专门对付铁道游击队的特务组织，使铁道游击队面临一次又一次的险境。铁道游击队在人民的支持下，周旋于铁道和微山湖之间，经受了残酷的考验，发展壮大起来。
抗日战争的最后一年，铁道游击队在铁路线上和日本鬼子进行了最后一战，这一战以日本鬼子的失败告终。日军大佐龟田，为了对付铁道游击队，曾经仔细研究过中国的《水浒》，他本想从梁山好汉中寻找铁道游击队的弱点，然后分化瓦解，各个击破。他失败了，他把那本《水浒》付之一炬……
